MALDI-TOF MS로 본연의 단백질 복합체(intact protein complexes)를 분석하기 위해서는 특별히 고안된
고질량 검출시스템이 필요합니다. CovalX의 독특한 conversion dynode 기술을 토대로 한 차세대 고질량
시스템을 소개합니다. HM2와 HM2 TUVO High-Mass System은 nM 감도로 그 동안 근접하기 어려웠던 최대 1.2MDa까지의 거대분자이온을 검출해 냅니다. HM2 High-Mass System은 거대고분자 질량측정의 새로운
기준입니다. HM2 TUVO는 HM2의 기능과 더불어 양극/음극 모든 모드에서 이온 측정이 가능합니다.
HM2 와 HM2 TUVO High-Mass System은 모든 표준 MALDI TOF MS에서 이용할 수 있습니다 :
· Applied Biosystems: 5800, 4800, Voyager series (DE Pro, DE STR).
· Bruker: biflex, reflex, autoflex and ultraflex series.
· Shimadzu Kratos: Axima series.
CovalX HM2 High-Mass System은 MALDI-TOF MS의 이전 기능에 아무런 변화를 주지 않습니다. 개조 후에도,
선형모드의 표준 검출기 (linear mode detector)를 제거하지 않고 그대로 사용합니다. CovalX의 아이팟 터치
컨트롤러 버튼을 간단히 눌러 몇 초 만에 표준 검출과 고질량 검출 중에서 하나를 간단히 선택할 수 있습니다.
CovalX HM2 High-Mass System으로 다음과 같은 응용분야에 이용할 수 있습니다.
MALDI-TOF 질량분석기를 이용하여 단백질 복합체를 분석하는 동안 단백질 복합체가 붕괴되는 경향 때문에
대부분 노동집약적이어야 합니다. 이러한 불편을 해결하고자 CovalX는 High-Mass MALDI-TOF 질량분석기를
이용한 간편하고 신속한 단백질 복합체 분석방법을 개발하였습니다. 분석 첫 단계는 전용 cross-linking 시약과
프로토콜을 사용하여 관심 있는 비공유 복합체를 안정화하는 것입니다.
High-Mass MALDI ToF mass spectra of the protein complex Thymidine Kinase (TK).
A. TK (1ul) analyzed without cross-linking. Only the monomer is detected. B. TK
analyzed after cross-linking with disuccimidyl suberate (0.1 mg/ml, 30 minutes
incubation time). TK dimer is detected with m=87.8 kDa. C. Same analysis with
CovalX K100 analysis reagent (0.1 mg/ml, 30 minutes incubation time).
High-Mass MALDI TOF 질량분석기로 본연의 단백질 복합체(intact protein complex)를 분석하기
위해서는, 특히 고효율 cross-linking 시약을 이용한 복합체의 안정화가 중요합니다. CovalX는
High-Mass MALDI 분석을 위한 비공유 단백질 복합체 준비 전용 시약과 buffer를 개발하였습니다.
cross-linking 효율을 높이기 위해, CovalX 시약은 최고의 효율로 특정 단백질 복합체를 공유할 수
있도록 길이가 다른 spacer를 가진 cross-linkers cocktail이 포함되어 있습니다. CovalX cross-linking
시약의 특이성으로 오염되었거나 정제되지 않은 샘플에서도 단백질 복합체를 공유 안정화 할 수 있습니다.
복잡한 단백질 혼합물 중에서 단백질 상호작용을 분석할 때, High-Mass MALDI-TOF MS로 얻은 복잡한
데이터를 처리할 소프트웨어가 필요합니다. 여러분의 취득 소프트웨어 (acquisition software)를 바꿀 필요
없이, CovalX의 complex tracker로 모든 표준 MALDI-TOF MS 파일을 불러옵니다. 불러온 후, 데이터를
비공유 복합체의 존재여부를 통계적으로 평가하기 위한 프로젝트로 관리합니다.
프로젝트 매니저로, 같은 화면에서 여러 쌍의 (control/cross-link) 스펙트럼을 분석할 수 있습니다.
복잡한 검출 평가도구를 이용하여 비공유 복합체의 존재여부를 통계적으로 계산합니다.
