Glycan Release


당단백질이나 당지질과 같은 당결합물질의 glycans 분석을 위한 첫 번째 스텝은 부착되어 있는 glycans을 떼어내는 것입니다. 사용 가능한 화학적 또는 효소 기법 중에서 최상의 glycans release 방법을 선택하는 데 세심한 주의를 기울여야 합니다.

Chemical Release
Ludger Liberate Hydrazinolysis N- and O-glycan release kit 

당단백질 바이오의약품의 N-glycans과 O-glycans을 떼어내는데 필요한 시약과 소모품으로 구성되어 있습니다. 건조된 당단백질을 anhydrous hydrazine과 함께 인큐베이션 시킨 후 떼어낸 glycans을 정제하는 과정을 거칩니다. Release 결과를 성공적으로 얻기 위해서는, 엄격히 통제된 조건하에서 고순도 hydrazine을 사용하여 Hydrazinolysis를 수행해야 합니다. Hydrazinolysis의 가장 큰 장점은 release conditions을 조절하여 각각의 N-glycans과 O-glycans 또는 N-glycans과 O-glycans을 모두 떼어낼 수 있는 다용도성이라 할 수 있습니다. 


  • 처리 샘플 수량: 6개 샘플 두 세트 또는 12개의 당단백질 샘플 
  • 처리 샘플 농도: 일반적으로 검체당 최대 1 mg의 당단백질 
  • 유용 샘플: 당단백질 바이오의약품

Part number: LL-HYDRAZ-A2

구성품 :

Cat. #
Item
Quantity
LL-HYDRAZINE-01
Hydrazinolysis Release Reagent
2 x 3ml
LL-BICARB-01
Solid sodium bicarbonate
2 x 0.33 g
LL-OCTANOL-01
Octanol
2 x 0.2 ml
LL-ACETANHYD-01
Acetic anhydride
2 x 0.5 ml
LL-TFA-5PC-01
TFA solution
2 x 4 ml
LC-EB20-01
LudgerClean™ EB20 cartridges
2 x 6 cartridges
LC-EB20-WASHA-01
EB20 Wash A Solution
2 x 12 ml
LC-EB20-WASHB-01
EB20 Wash B Solution
2 x 12 ml
LC-CEX-H-01
LudgerClean™ CEX cartridges
2 x 6 cartridges
LL-WASTEV-01
Wash waste vials
2 x 6 vials
LL-REACT-01
Glass reaction vials with PTFE lined caps
2 x 6 vials
LL-COLLV-01
Glass collection vials with PTFE lined caps
2 x 6 vials
Ludger Liberate Orela O-glycan Release Kit

당단백질 바이오의약품의 O-glycans을 떼어내는데 필요한 시약과 소모품으로 구성되어 있습니다. Released glycan은 reductive amination에 의한 형광 tagging free reducing terminii를 가지고 있습니다.


  • 처리 샘플 수량: 6개 샘플 두 세트 또는 12개의 당단백질 샘플 
  • 처리 샘플 농도: 일반적으로 검체당 최대 1 mg의 당단백질
  • 유용 샘플: 당단백질 바이오의약품

Part number: LL-ORELA-A2

구성품 :

Cat. #
Item
Quantity
LL-ORELAREAGENT-01
Orela Release Reagent
2 x 3ml
LL-ACETIC-50P-01
Acetic Acid Solution
2 x 3ml
LC-CEX-H-01
LudgerClean™ CEX-H cartridges
2 x 6 cartridges
LL-REACT-01
Glass reaction vials with PTFE lined caps
2 x 6 vials
LL-COLLV-01
Glass collection vials with PTFE lined caps
2 x 6 vials
Enzymatic (endoglycosidase) Release

Endoglycosidases는 당단백질 분석을 위해 가장 널리 사용되는 효소로 당단백질에서 온전한 glycans을 떼어내는데 사용하는 반면, Exoglycosidases는 glycans 말단에 있는 단당류 즉, sialic acid, galactose, β-N-acetylgucosamine, mannose 등을 떼어내는데 사용합니다.

Endoglycosidases의 대표적인 효소인 PNGase F는 asparagine 아미노산과 N-glycans chitobiose core의 첫 번째 β-N-acetylglucosamine (GlcNAc) 사이를 절단합니다. Endo F와 Endo H는 첫 번째 GlcNAc과 두 번째 GlcNAc 사이를 절단해 N-glycans을 떼어내고, deglycosylated 단백질에는 용해도를 높여주는 친수성 잔기를 남겨 단백질이 응집체 형태로 침전될 가능성을 감소시켜 줍니다. PNGase F는 대부분의 N-glycans을 떼어내는 반면, Endo H 및 Endo F는 특정 유형의 N-glycans을 떼어내지 못합니다.


또한 Endoglycosidases에는 serine 또는 threonine 아미노산에서 Core 1 O-glycan [Gal-β (1-3) GalNAc-α] 을 떼어내는 O-glycosidase가 있습니다. 가끔 O-glycans은 branched 및 linear linkages의 galactose에 추가로 단당류가 연결되어 있는 경우, O-glycosidase를 사용하기에 앞서 sialidase 및 galactosidase와 같은 exoglycosidase로 추가 단당류를 제거해 주어야 합니다.

PNGase F (Peptide N Glycosidase F) and recombinant PNGase F

PNGase F는 당단백질 및 당펩타이드에서 모든 유형 (high-mannose, hybrid 및 complex)의 N-glycans을 떼어내는데 적합합니다. PNGase F는 식물과 곤충의 N-glycan에서 볼 수 있는 α-(1,3) core fucose가 부착된 N-glycans을 떼어내지 못합니다

Part Number
Amount of Enzyme
E-PNG01¹
60 µL
E-PNG01-20¹
20 µL
E-PNG01-200 (E-PNG05) ²
200 µL

¹ includes buffer, denaturant and Triton-X
² includes enzyme only

recombinant PNGase F

recombinant PNGase F from Elizabethkingia miricola

Part Number
Amount of Enzyme
E-RPNG01¹
60 µL
E-RPNG01-20¹
20 µL
E-RPNG01-200²
200 µL

¹ includes buffer, denaturant and Triton-X
² includes enzyme only


Endo F1

당단백질 및 당펩타이드에서 high mannose 및 일부 hybrid N-glycans을 떼어냅니다.

Part Number
Amount of Enzyme
E-EF01¹
60 µL
E-EF01-20¹
20 µL
E-EF01-200²
200 µL

¹ includes buffer
² includes enzyme only


Endo F2

당단백질 및 당펩타이드에서 biantennary glycans을 선택적으로 떼어냅니다.

Part Number
Amount of Enzyme
E-EF02¹  
60 µL
E-EF02-20¹
20 µL
E-EF02-200²
200 µL

¹ includes buffer denaturant and Triton-X
² includes enzyme only


Endo F3

당단백질 및 당펩타이드에서 triantennary 및 alpha(1-6) fucosylated biantennary N-glycans을 선택적으로 떼어냅니다.

Part Number
Amount of Enzyme
E-EF03¹
60 µL
E-EF03-20¹
20 µL
E-EF03-200²
200 µL

¹ includes buffer denaturant and Triton-X
² includes enzyme only


Endo F Multi-Kit

Native 및 denatured 조건 모두에서 N-glycans을 떼어냅니다. 각각의 효소는 N-glycans release에 대한 뚜렷한 특이성을 가지고 있어, 당단백질 및 당펩타이드에 존재하는 모든 N-glycans을 완전히 떼어내거나, 각각의 효소를 독립적으로 사용하여 N-glycans 유형을 결정할 수 있습니다.

Part Number
Amount of Enzyme
KE-EFX3¹
20 µL / each

Endo H

당단백질 및 당펩타이드에서 hybrid 또는 high mannose glycan을 떼어내지만, complex glycan은 떼어내지 못합니다.

Part Number
Amount of Enzyme
E-EH02¹
60 µL
E-EH02-20¹
20 µL
E-EH02-200²
200 µL

¹ includes buffer and denaturant
² includes enzyme only


O-glycosidase

당단백질 또는 당펩타이드의 serine 또는 threonine 잔기에 부착되어 있는 Gal-β (1-3) GalNAc- alpha disaccharides만을 떼어냅니다.

추가적으로 부착되어 있는 Sialic acid, galactose, fucose 또는 GlcNAc과 같은 단당류는 O-Glycosidase를 처리하기 전에 먼저 적절한 exoglycosidase로 제거해야 합니다. 최소한, sialic acid를 제거하기 위한 Neuraminidase Au (alpha-2-3,6,8,9)와 같은 sialidase가 필요합니다.

Part Number
Amount of Enzyme
E-G001¹
60 µL
E-G001-20¹
20 µL
E-G001-200²
200 µL

¹ includes buffer and denaturant
² includes enzyme only


Endo- β-Galctosidase

Unbranched, repeating poly-N-acetyllactosamine 구조에서 Internal β(1-4) galactose linkage를 절단합니다. Keratan sulfate와 같은 sulfated 구조도 절단합니다. 기질의 Branching and/or fucosylation은 절단 효율을 감소시키거나 절단을 배제합니다.

Endo- β-Galctosidase는 생물학적으로 중요한 glycoconjugate에서 poly-N-acetyllactosamine 구조를 확인하거나 제거하는데 유용합니다.   

Part Number
Amount of Enzyme
E-XBG01¹
60 µL
E-XBG01-20¹
20 µL
E-XBG01-200²
200 µL

¹ includes buffer and denaturant
² includes enzyme only


Enzymatic CarboRelease Kit 

당단백질 탈당화를 위해 개발된 이 키트에는 모든 N-glycans과 여러 O-glycans을 떼어내는데 필요한 효소와 버퍼가 들어 있습니다. 효소는 20 ul vials에 별도로 개별 포장되어 있습니다. 이 키트를 이용하면 Enzymatic DeGlycoMx Kit (#KE-DGMX)보다 당단백질에 부착된 glycans을 더 완벽하게 특성화 할 수 있습니다.

Part Number
Amount of Enzyme
KE-DG01
20 µL / each

Each of the following enzymes in separate vials: 
PNGase F (E. meningosepticum) 
O-Glycosidase (S. pneumoniae) 
Neuraminidase (A. ureafaciens) 
ß-Galactosidase (S. pneumoniae) 
ß-N-Acetylglucosaminidase (S. pneumonia) 


Enzymatic DeGlycoMx Kit 

당단백질 탈당화를 위해 개발된 이 키트에는 반응 당 최대 50 ug의 단백질을 10 회 처리하여 0.5mg의 당단백질에서 모든 N-glycans과 대부분의 O-glycans을 떼어내는데 필요한 효소가 미리 혼합된 칵테일 형태의 DeGlycoMx가 들어 있습니다.

이 키트는 사용하기 쉽고 효과적입니다. Denatured 샘플에 DeGlycoMx 효소 2µl를 추가하고 버퍼를 넣어 37˚C에서 3시간 동안 배양합니다.

Part Number
Amount of Enzyme
KE-DGMX
20 µL
KE-DGMX-100
100 µL

Enzymes are provided as one 20 µL premixed cocktail including: 
PNGase F (E. meningosepticum) 
O-Glycosidase (S. pneumoniae) 
Neuraminidase (A. ureafaciens) 
ß-Galactosidase (S. pneumoniae) 
ß-N-Acetylglucosaminidase (S. pneumonia) 


LudgerZyme Ceramide Glycanase Kit

Glycosphingolipids (GSL)는 동물에서 가장 풍부하고 종류가 다양한 당지질입니다 (또한 곰팡이, 식물 및 무척추 동물에도 존재합니다). GSL에 존재하는 glycan은 생리학 및 병리학적으로 중요한 역할을 합니다.

GSL을 식별하고 측정하는 능력은 Tay-Sachs 및 Gaucher 's disease와 같은 lysosomal storage 질환뿐만 아니라 발달 신경 생물학 연구에서도 중요합니다. 면역 요법의 가능한 표적으로서 GSL에 대한 관심도 증가하고 있습니다.

Ceramide glycanase는 GSL에서 glycan을 떼어내어 특성화 할 수 있는 효소로 β-glycosyl 결합을 절단하여 GM1, GM2 및 GM3을 포함한 glycans을 release합니다. Glycans은 LudgerTag labeling kit를 사용하여 라벨링 할 수 있습니다.

Hirudo medicinalis에서 Ceramide glycanase를 정제하여 이를 buffer 및 GM1 glycolipid 기질과 함께 키트로 제공합니다.

Part Number
Amount of Enzyme
LZ-CER-HM-KIT
55 µL

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