Sialic Acid Analysis
시알산 분석은 바이오의약품의 특성분석에 대한 ICH Q6B 가이드라인에 명시된 규제 요건입니다. 시알산 (neuraminic acid유도체 계열)은 일반적으로 N-glycans 및 O-glycans의 non-reducing termini에서 발견되는 음전하 단당류입니다. Glycans의 말단에 위치하기 때문에, 시알산은 많은 당단백질의 상호 작용을 위한 접촉 지점이 될 수 있습니다. 또한 당단백질의 안정성과 3D 구조에서 중요한 역할을 하고 있고, 많은 생물학적 상호 작용에 관여합니다. 시알산은 가끔 중추적인 기능에 영향을 미칩니다.
- IgG의 sialyation는 ADCC를 감소시키고 항 염증 활성을 증대 시킵니다.
- O-acetylated sialic acids는 리간드 상호작용을 변화시키고 degradation에 영향을 미칠 수 있습니다
(Neu5,9Ac2를 포함한 O-acetylated 시알산 EPO에서 발견) - 시알산의 존재는 또한 간 세포에 위치한 asialoglycoprotein receptor에 의한 흡수를 방지함으로써 당단백질의 혈청 반감기를 증대 시킵니다.
- 다양한 종류의 시알산이 자연에서 발견되지만, 바이오의약품의 N-glycans과 O-glycans에서 발견되는 두가지 주요 시알산은 N-acetyl-neuraminic acid (Neu5Ac or NANA)와 N-glycolyl-neuraminic acid (Neu5Gc or NGNA)입니다.
- 인간은 Neu5Gc를 합성할 수 없으며 약물에 존재하는 Neu5Gc는 만성 염증과 같은 면역 반응을 유발할 수 있습니다. Anti-Neu5Gc 항체가 정상 인간 혈청에서 검출되었으며, 바이오의약품에 함유된 모든 NeuGc를 중화시켜 약효를 저하시킬 수 있습니다.
- 세포주의 선택은 바이오의약품에 존재하는 시알산 유형에 큰 영향을 미칠 수 있음을 인식하여야 합니다. 예를 들어 마우스 IgG에 있는 시알산의 대부분이 종종 NGNA입니다. 따라서 약물 안전성과 효능을 위해 제품 수명 주기의 모든 단계에서 시알산의 수준과 유형을 모니터링하고 QC 배치간 일관성을 모니터링하는 것이 필수적입니다.
LudgerTag DMB Sialic Acid Labeling Kit는 시알산의 정성 분석을 위해 개발되었습니다. 키트에는 당단백질에서 시알산을 떼어내는 시약이 들어 있습니다. Released 시알산은 amination-cyclization 반응으로 DMB 염료와 결합합니다. 이 키트에는 sialic acid reference panel, N-acetyl neuraminic acid및 N-glycolyl neuraminic acid standards를 포함한 최대 22 개 샘플 처리용 시약과 재료가 들어 있습니다.
Sialic Acid Analysis Workflow:
- 전체 약물의 sialylation 정도 – 물질당 시알산 residues의 절대 정량 (nmol/mg protein)
- Neu5Ac : Neu5Gc 상대 정량
- O-acetylated 시알산 확인 및 상대적 비율
구성품:
| Cat. # | Item | Quantity |
| LT-DMB-01 | DMB Dye | 0.7 mg |
| LT-ACETIC2M-01 | Acetic Acid 2 Molar | 2 x 1.1 mL |
| LT-MERCAPTO-01 | Mercaptoethanol in Acetic acid (1.4 Molar) | 500 µL |
| LT-DITHIO-01 | Sodium Dithionite (Reductant) | 4 mg |
| CM-NEUAC-01 | N-acetylneuraminic acid quantitative standard | 1 nmol |
| CM-NEUGC-01 | N-glycolylneuraminic acid quantitative standard | 1 nmol |
| CM–SRP-01 | Sialic Acid Reference Panel containing Neu5Ac, Neu5Gc, Neu5,7Ac2, Neu5Gc,9Ac, Neu5,8Ac2, Neu5,9Ac2 and Neu5,x,xAc3 (where x is an unknown acetyl position) | 1.25 nmol (total sialic acids) |
Product/Ordering Information:
| Release sialic acid and label with DMB: | |
| LT-KDMB-A1 | LudgerTag Quantitative Sialic Acid Release and DMB Labelling Kit |
| Standards and Controls: | |
| GCP-FET-50U-X4 | Fetuin Glycoprotein Standard (4 vials containing 50µg) |
| BQ-GPEP-A2G2S2-10U | LudgerBioQuant GPEP A2G2S2 glycopeptide -- Quantitative Process Standard |
| CM-NEU5,9,AC2-01 | 5-N -acetyl-9-O-acetyl neuraminic acid (Neu5,9Ac2) -- Reference Standard |
| CM-NEU-AC-01 | N -acetylneuraminic acid (Neu5Ac or NANA), 1 nmol -- Quantitative Standard |
| CM-NEU-AC-100 | N -acetylneuraminic acid (Neu5Ac or NANA), 100 nmol -- Quantitative Standard |
| CM-NEU-GC-01 | N -glycolylneuraminic acid (Neu5Gc or NGNA), 1 nmol -- Quantitative Standard |
| CM-NEU-GC-100 | N -glycolylneuraminic acid (Neu5Gc or NGNA), 100 nmol -- Quantitative Standard |
| CM-SRP-01 | Sialic acid reference panel -- System Suitability and Reference Standard |
| CAB-STD-NEUAC-01 | Sialidase testing Panel, 2-AB labled, 100 pmol |
| CPROC-STD-NEUAC-01 | Sialidase testing Panel, Procainamide labled, 20 pmol |
| HPLC Analysis: | |
| LS-R1-4.6x150 | LudgerSep R1 HPLC Column |
| UHPLC Analysis: | |
| LS-UR2-2.1x100 | LudgerSep uR2 UHPLC Column |
