Ceramide glycanase는 β-glycosyl 결합을 절단하여 다양한 glycosphingolipids를 deglycosylate화하는 데 사용할 수 있습니다. Ceramide glycanase는glycan 부분을 절단하고 LudgerTag 라벨링 기술에 접근 가능하게 하여 glycosphingolipids의 glycosylation 패턴을 식별할 수 있습니다.

Glycosphingolipids (GSL)은 동물에서 가장 풍부하고 다양한 종류의 glycolipids입니다 (그리고 균류, 식물, 무척추동물에도 존재합니다). GSL에 존재하는 glycans은 생리학 및 병리학에서 중요한 역할을 합니다. GSL을 식별하고 측정하는 능력은 Tay-Sachs 및 Gaucher's disease와 같은 리소좀 저장 질환 뿐 만 아니라 발달 신경생물학 연구에 중요합니다. 또한 면역 요법의 가능한 표적으로서 GSL에 대한 관심이 커지고 있습니다.

Ceramide glycanase는 GSL에서 glycans을 떼어내어 특성화를 가능하게 하는 효소입니다. β-glycosyl 결합을 절단하여 GM1, GM2 및 GM3이 포함된 glycans을 절단합니다. 그런 다음 LudgerTag 라벨링 기술을 사용하여 glycans을 라벨링할 수 있습니다.

키트에는 효소, 반응 완충액 및 GM1 표준이 포함되어 있습니다. 최대 150회 반응에 충분합니다.

단백질 탈당화를 위해 개발된 이 키트에는 반응 당 최대 0.5 µg의 단백질을 10 회 반응시켜 0.5mg의 당단백질에서 모든 N-glycans과 대부분의 O-glycans을 제거하는 데 필요한 효소가 미리 혼합된 칵테일 형태의 키트입니다.

이 키트는 사용하기 쉽고 효과적입니다. DeGlycoMx 효소 2 µL를 denaturated 샘플과 제공된 반응 버퍼에 넣고 37°C에서 3시간 동안 배양합니다.

키트에는 효소와 반응 버퍼가 포함되어 있습니다. 최대 20회 반응에 충분합니다.

Enzymes are provided as one 20 µL premixed cocktail including:
1. PNGase F (E. meningosepticum)
2. O-Glycosidase (S. pneumoniae)
3. Neuraminidase (A. ureafaciens)
4. ß-Galactosidase (S. pneumoniae)
5. ß-N-Acetylglucosaminidase (S. pneumonia)

이 키트에는 당단백질을 탈당화하고 모든 N-glycans과 여러 O-glycans을 제거하는 데 필요한 효소와 버퍼가 포함되어 있습니다.

효소는 개별 20 µL 바이알에 별도로 포장됩니다. 이를 통해 연구자는 효소 혼합물인 KE-DGMX 보다 당단백질에 부착된 glycans을 더욱 완벽하게 특성화할 수 있습니다 .

키트에는 효소, 반응 버퍼 및 Bovine Fetuin (대조군)가 포함되어 있습니다. 각 효소는 최대 20회 반응에 충분합니다.

Each of the following enzymes in separate vials:
1. PNGase F (E. meningosepticum)
2. O-Glycosidase (S. pneumoniae)
3. Neuraminidase (A. ureafaciens)
4. ß-Galactosidase (S. pneumoniae)
5. ß-N-Acetylglucosaminidase (S. pneumonia)

분기되지 않은 반복 poly-N-acetyllactosamine 구조에서 Internal β(1-4) galactose 결합을 절단합니다. Endo- β-Galctosidase는 생물학적으로 중요한 glycoconjugate에서 poly-N-acetyllactosamine 구조를 확인하고 제거하는데 유용합니다.

1. ¹ includes buffer
2. ² includes enzyme only

펩타이드와 단백질의 serine 또는 threonine 잔기에 부착된 치환되지 않은 Gal-β (1-3) GalNAc- alpha disaccharides만을 분리합니다.

Sialic acid, galactose, fucose 또는 GlcNAc과 같은 단당류는 O-Glycosidase로 처리하기 전에 먼저 적절한 exoglycosidase로 제거해야 합니다. Sialic acid를 제거하려면 최소한 Neuraminidase Au (alpha-2-3,6,8,9), E-S001과 같은 sialidase가 필요합니다.

1. ¹ includes buffer and denaturant
2. ² includes enzyme only

Endo H는 hybrid 또는 high mannose N-glycan을 분리하지만 complex N-glycan은 분리하지 않습니다.

올리고당의 diacetylchitobiose core에 있는 두 개의 N-acetylglucosamine 잔기 사이를 절단하여 asparagine에 하나의 N-acetylglucosamine 잔기가 남아 있는 절단된 당 분자를 생성합니다. 반면에 PNGase F는 올리고당을 그대로 제거합니다.Detergent와 heat denaturation은 일부 당단백질의 분리 속도를 증가시킬 수 있습니다.

1. ¹ includes buffer and denaturant
2. ² includes enzyme only

Native 및 denatured 조건 모두에서 N-glycans을 절단합니다. 각각의 효소는 N-glycans 절단에 대한 뚜렷한 특이성을 가지고 있어, 당단백질 및 당펩타이드에 존재하는 모든 N-glycans을 완전히 절단하거나, 각 효소를 독립적으로 사용하여 존재하는 N-glycans의 유형을 결정할 수 있습니다.

1. ¹ includes buffer

Endo F3는 triantennary 및 alpha(1-6) fucosylated biantennary N-glycans을 선택적으로 분리합니다.

Nonfucosylated biantennary N-glycans도 절단되지만 속도는 40배 감소합니다. 올리고당의 diacetylchitobiose core에 있는 두 개의 N-acetylglucosamine 잔기 사이를 절단하여 asparagine에 하나의 N-acetylglucosamine 잔기가 남아 있는 절단된 당 분자를 생성합니다. 반면 PNGase F는 올리고당을 그대로 제거합니다. (1-3) fucosylation은 효소 활성을 억제합니다. Oligomannose와 hybrid glycans에는 활성이 없습니다.

1. ¹ includes buffer
2. ² includes enzyme only

Endo F2는 당단백질에서 biantennary N-glycans을 선택적으로 분리합니다.

또한 high mannose glycans을 절단하지만 속도는 40배 감소합니다. 올리고당의 diacetylchitobiose core에 있는 두 개의 N-acetylglucosamine 잔기 사이를 절단하여 asparagine에 하나의 N-acetylglucosamine 잔기가 남아 있는 절단된 당 분자를 생성합니다. 반면에 PNGase F는 올리고당을 그대로 제거합니다.

Endo F2는 PNGase F보다 단백질 형태에 덜 민감하므로 native 단백질의 deglycosylation에 더 적합합니다. 그러나 최적의 결과를 얻기 위해서는 당단백질의 denaturation을 권장합니다.

1. ¹ includes buffer
2. ² includes enzyme only

Endo F1는 high mannose와 일부 hybrid N-glycans을 분리합니다.

Core fucosylation은 활성을 50배 감소시킵니다. 올리고당의 diacetylchitobiose core에 있는 두 개의 N-acetylglucosamine 잔기 사이를 절단하여 asparagine에 하나의 N-acetylglucosamine 잔기가 남아 있는 절단된 당 분자를 생성합니다. 반면에 PNGase F는 올리고당을 그대로 제거합니다.

1. ¹ includes buffer
2. ² includes enzyme only

recombinant PNGase F from Elizabethkingia miricola

PNGase F는 당단백질과 당펩타이드에서 모든 유형 (high-mannose, hybrid 및 complex)의 N-glycans을 절단하는데 적합합니다.

이 효소는 asparagine을 aspartic acid로 demaidate하고, 올리고당은 그대로 둡니다. Denaturation은 절단 속도를 증가 시킵니다. 대부분의 native 단백질을 ​​완전히 N-deglycosylation화 할 수 있지만 배양 시간을 늘려야 합니다. 이 효소는 반응 조건 (37°C)에서 최소 96시간 동안 완전히 활성 상태를 유지합니다. PNGase F는 식물과 곤충의 당단백질에서 일반적으로 발견되는 α(1-3) linked core fucose를 함유한 N-glycans을 제거하지 못합니다. 이 목적을 위해서는 peptide N-glycosidase A를 사용하십시오.

1. ¹ includes buffer, denaturant and Triton-X
2. ² includes enzyme only

PNGase F는 당단백질과 당펩타이드에서 모든 유형 (high-mannose, hybrid 및 complex)의 N-glycans을 절단하는데 적합합니다.

이 효소는 asparagine을 aspartic acid로 demaidate하고, 올리고당은 그대로 둡니다. Denaturation은 절단 속도를 증가 시킵니다. 대부분의 native 단백질을 ​​완전히 N-deglycosylation화 할 수 있지만 배양 시간을 늘려야 합니다. 이 효소는 반응 조건 (37°C)에서 최소 96시간 동안 완전히 활성 상태를 유지합니다. PNGase F는 식물과 곤충의 당단백질에서 일반적으로 발견되는 α(1-3) linked core fucose를 함유한 N-glycans을 제거하지 못합니다. 이 목적을 위해서는 peptide N-glycosidase A를 사용하십시오.

1. ¹ includes buffer, denaturant and Triton-X
2. ² includes enzyme only